{"id":1242,"date":"2015-03-10T13:06:35","date_gmt":"2015-03-10T16:06:35","guid":{"rendered":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/testes-de-avaliacao-de-genotoxicidade\/"},"modified":"2021-04-20T12:24:09","modified_gmt":"2021-04-20T15:24:09","slug":"testes-de-avaliacao-de-genotoxicidade","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/testes-de-avaliacao-de-genotoxicidade\/","title":{"rendered":"Testes de avalia\u00e7\u00e3o de genotoxicidade"},"content":{"rendered":"

Testes de avalia\u00e7\u00e3o de genotoxicidade<\/h3>\n

Por: Thayzi O. Zeni<\/strong><\/p>\n

Publicado em: 10\/03\/2015<\/strong><\/p>\n

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Os cromossomos s\u00e3o amplamente utilizados em estudos citogen\u00e9ticos cl\u00e1ssicos, sendo muito comum a observa\u00e7\u00e3o e quantifica\u00e7\u00e3o de aberra\u00e7\u00f5es durante as divis\u00f5es celulares. Embora o uso da citogen\u00e9tica forne\u00e7a resultados precisos, a complexidade do trabalho a ser realizado e a dificuldade causada pela presen\u00e7a de artefatos tem estimulado o surgimento de t\u00e9cnicas mais simples para identificar e quantificar danos cromoss\u00f4micos (Fenech, 2000). Dentre os m\u00e9todos alternativos mais comumente utilizados, est\u00e3o os micron\u00facleos e os ensaios cometa (van der Oost et al., 2003)<\/span><\/p>\n

Teste de micron\u00facleo<\/span><\/strong><\/span><\/p>\n

<\/span>Micron\u00facleo \u00e9 uma massa de cromatina originada de fragmentos cromoss\u00f4micos ou de cromossomos inteiros, que se perderam durante a divis\u00e3o celular, devido aos eventos clastog\u00eanicos (quebra de cromossomos) ou aneug\u00eanicos (<\/span>que induzem a aneuploidia ou a segrega\u00e7\u00e3o cromoss\u00f4mica <\/span>anormal) (<\/span>Figura <\/span>1). Este m\u00e9todo possui a capacidade de detectar a quebra de<\/span> cromossomos e tamb\u00e9m a segrega\u00e7\u00e3o cromoss\u00f4mica anormal (Ribeiro et al., <\/em>2003). Baseia-se no fato de que a forma\u00e7\u00e3o espont\u00e2nea de micron\u00facleos \u00e9 baixa e quase uniforme entre as esp\u00e9cies. Desta forma, efeitos de subst\u00e2ncias que provoquem as quebras cromoss\u00f4micas ou ainda afetem componentes do fuso ou da regi\u00e3o centrom\u00e9rica, podem ser detectados a partir da presen\u00e7a de micron\u00facleos (Heddle et al.,1991).<\/span><\/p>\n

\"figura<\/p>\n

Figura <\/span>1. <\/span>Micron\u00facleo em eritr\u00f3cito (seta) de sangue perif\u00e9rico de Tilapia rendall<\/em>. Colora\u00e7\u00e3o de<\/span> Giemsa 5% (Fonte: Rivero, 2007).<\/span><\/p>\n

<\/span>A desvantagem deste m\u00e9todo est\u00e1 no fato de o teste s\u00f3 poder ser utilizado em c\u00e9lulas eucari\u00f3ticas em divis\u00e3o, n\u00e3o apresentando bons resultados em popula\u00e7\u00f5es de c\u00e9lulas que n\u00e3o estejam em divis\u00e3o ou nas quais as caracter\u00edsticas da divis\u00e3o celular n\u00e3o sejam bem conhecidas (Fenech, 2000). As vantagens do uso desse m\u00e9todo, entretanto, s\u00e3o in\u00fameras. Carvalho et al. (2002) apontaram a possibilidade de avalia\u00e7\u00e3o de um grande n\u00famero de amostras de maneira relativamente r\u00e1pida e o fato deste n\u00e3o ser invasivo, permitindo identificar aumento na frequ\u00eancia de muta\u00e7\u00f5es em c\u00e9lulas expostas \u00e0 in\u00fameros agentes genot\u00f3xicos. Esse m\u00e9todo tamb\u00e9m \u00e9 considerado simples, confi\u00e1vel, sens\u00edvel e de baixo custo (Russo et al., 2004), o que possibilita r\u00e1pida detec\u00e7\u00e3o de impactos genot\u00f3xicos nos organismos.<\/span><\/p>\n

<\/span>Al\u00e9m das caracter\u00edsticas mencionadas, o teste de micron\u00facleo pode ser utilizado em qualquer tipo de popula\u00e7\u00e3o celular em prolifera\u00e7\u00e3o, sem que haja necessidade de conhecimento pr\u00e9vio do cari\u00f3tipo do animal avaliado (Hayashi et al., 1998). Por estes motivos, esta t\u00e9cnica \u00e9 indicada para triagens de rotina e monitoramentos ambientais (Siu et al., 2003), permitindo assim a avalia\u00e7\u00e3o dos impactos biol\u00f3gicos em ambientes aqu\u00e1ticos polu\u00eddos.<\/span><\/p>\n

<\/span>Devido ao fato de peixes apresentarem cromossomos de tamanho reduzido e geralmente em grande quantidade, as pesquisas de aberra\u00e7\u00f5es cromoss\u00f4micas durante a met\u00e1fase tornam-se dif\u00edceis (Hayashi et al., 1998). As an\u00e1lises de micron\u00facleo, entretanto, s\u00e3o relativamente simples de serem realizadas, uma vez que peixes possuem eritr\u00f3citos nucleados (Hayashi et al., op. cit.).<\/span><\/p>\n

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O ensaio cometa<\/span><\/strong><\/span><\/p>\n

<\/span>O ensaio cometa, ou eletroforese em gel de c\u00e9lula \u00fanica, \u00e9 um m\u00e9todo utilizado na pesquisa de les\u00f5es gen\u00f4micas, que evoluem para muta\u00e7\u00f5es quando n\u00e3o corrigidas (Gontijo e Tice, 2003). Este m\u00e9todo pode ser realizado em qualquer c\u00e9lula nucleada eucari\u00f3tica (Mitchelmore e Chipman, 1998) e apresenta como vantagens a alta sensibilidade para a detec\u00e7\u00e3o de danos no DNA, a possibilidade de uso de um n\u00famero reduzido de c\u00e9lulas, a facilidade de execu\u00e7\u00e3o e o custo acess\u00edvel (Tice et al., 2000). Al\u00e9m de apresentar boa produtividade e ser aplic\u00e1vel em qualquer organismo eucarioto (Castro, 2004).<\/span><\/p>\n

<\/span>O ensaio cometa \u00e9 uma ferramenta fundamental de investiga\u00e7\u00e3o em estudos de reparo de DNA, biomonitoramento ambiental e teste de genotoxicidade (Ross et al.<\/em>, 1995).<\/span><\/p>\n

<\/span>A t\u00e9cnica do cometa se baseia na detec\u00e7\u00e3o de fragmentos de DNA que, ap\u00f3s indu\u00e7\u00e3o por eletroforese, migram a partir do centro nuclear com uma velocidade superior a do DNA intacto, formando uma estrutura com aspecto de cauda de cometa (Tice et al.,1990) (<\/span>Figura 2<\/span>).<\/span><\/p>\n

\"figura<\/p>\n

Figura <\/span>2. <\/span>Resultado obtido ap\u00f3s a exposi\u00e7\u00e3o de Oreochromis niloticus <\/em>ao cromo. A. Classe 0 (c\u00e9lula sem danos); B. Classe1 (c\u00e9lula com pequenos danos); C. Classe 2 (danos m\u00e9dios) e D. Classe 3 (muitos danos). Fonte: Matsumoto et al., 2006.<\/span><\/p>\n

<\/span>A principal vantagem do ensaio de cometa \u00e9 sua alta sensibilidade a in\u00fameros tipos de danos de DNA (Bucker et al., 2006), sendo considerado em alguns casos, mais sens\u00edvel \u00e0 a\u00e7\u00e3o de agentes genot\u00f3xicos do que o teste de micron\u00facleo (Matsumoto et al.<\/em>, 2006).<\/span><\/p>\n

<\/span>Por conseguinte, pode-se inferir que tanto o teste de micron\u00facleo, quanto ensaio cometa s\u00e3o bons marcadores biol\u00f3gicos para a avalia\u00e7\u00e3o de genotoxicidade, sendo poss\u00edvel sua utiliza\u00e7\u00e3o em laborat\u00f3rio e\/ou a campo.<\/span><\/p>\n

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Refer\u00eancias<\/span><\/strong><\/p>\n

CARVALHO, M. B. RAMIREZ, A., GATT\u00c1S, G. J. F., GUEDES, A. L., AMAR, A., RAPOPORT, A., NETO, J. C. B., CURIONI, O. A., 2002. Correla\u00e7\u00e3o entre a evolu\u00e7\u00e3o cl\u00ednica e a frequ\u00eancia de micron\u00facleos em c\u00e9lulas de pacientes portadores de ca<\/span>rcinomas orais e da orofaringe. Revista da Associa\u00e7\u00e3o M\u00e9dica Brasileira, 48 (4): 317-322<\/span><\/p>\n

CASTRO, V. L., 2004.Aspectos da exposi\u00e7\u00e3o ambiental aos agroqu\u00edmicos no desenvolvimento animal. Cadernos de Ci\u00eancias e Tecnologia, 21: 469-497<\/span><\/p>\n

FENECH, M. The in vitro micronucleus technique, 2000. Mutation Research 455: 81\u201395<\/span><\/p>\n

GONTIJO, A. M. M. C., TICE, R., 2003. Teste do cometa para a detec\u00e7\u00e3o de dano no DNA e reparo em c\u00e9lulas individualizadas. In: RIBEIRO, L. R.; SALVADORI, D. M. F., MARQUES, E. K.(Org.). <\/span>Mutag\u00eanese Ambiental<\/span>. Canoas: Ulbrap. 173-200<\/span><\/p>\n

HAYASHI M, UEDA T, UYENO K, WADA K, KINAE N, SAOTOME K, TANAKA N. TAKAI A, SASAKI YF, ASANO N, SOFUNI T e OJIMA Y., 1998.<\/span><\/span>Development of genotoxicity assays systems that use aquatic organisms. Mutation Research, 399 (2): 125-133<\/span><\/span><\/p>\n

HEDDLE, J. A.  et al. 1991. Micronuclei as a index of cytogenetic damage: past, present and future. Environment Molecular Mutagenicity, 18: 277-291<\/span><\/span><\/p>\n

MITCHELMORE, C. L., CHIPMAN, J. K., 1998. DNA strand breakage in aquatic organisms and the potential value of the comet assay in environmental monitoring. <\/span>Mutation Research, 399: 135-147<\/span><\/p>\n

RIBEIRO, L.R.; SALVADOR, D.M.F.; MARQUES, E.K. Mutag\u00eanese Ambiental. Editora Ulbra. Canoas: 1o<\/sup> ed., 2003<\/span><\/p>\n

RIVERO, C. L. G., 2007. Perfil da frequ\u00eancia de micron\u00facleos e de danos no DNA de diferentes esp\u00e9cies de peixes do Lago Parano\u00e1, Bras\u00edlia, DF, Brasil. Disserta\u00e7\u00e3o apresentada a p\u00f3s gradua\u00e7\u00e3o em patologia molecular da Universidade Nacional de Bras\u00edlia<\/span><\/p>\n

ROSS, G. M., McMILLAN, T. J., WILCOX, P., COLLINS, A. R., 1995. The Single Cell Gel Electrophoresis Assay (comet assay): Technical Aspects and Applications. Report on the 5 thLH Gray Trust Workshop, Institute of Cancer Research. Mutation Research, 337: 57-60<\/span><\/p>\n

RUSSO, C., ROCCO, L., MORESCALCHI, M. A., STINGO, V., 2004. <\/span>Assessment of environmental stress by the Micronucleus test and the Comet assay on the genome of teleost populations from two natural environments. Ecotoxicology and Environmental Safety 57: 168-174<\/span><\/p>\n

SIU, W.H.L., CAO, J., JACK, R.W., WU, R.S.S., RICHARDSON, B.J., XU, L.,LAM, P.K.S., 2004. Application of the comet and micronucleus assays to the detection of B(A) P genotoxicity in haemocytes of the green-lipped mussel (Perna viridis<\/em>). Aquatic Toxicology, 66: 381-392<\/span><\/p>\n

TICE, R. R., AGURELL, E., ANDERSON, D., BURLINSON, B., HARTMANN, A., KOBAYASHI, H., MIYAMAE, Y., ROJAS, E., RYU, J. C., SASAKI, Y. F. , 2000. Single Cell gel\/comet assay: guidelines for in vitro and in vivo genetic toxicology testing. Environmental and Molecular Mutagenesis, 35: 206-22<\/span><\/p>\n

VAN DER OOST, R., BEYER, J., VERMEULEN, N. P. E., 2003. Fish bioaccumulation and biomarkers in environmental risk assessment: a review. Environmental Toxicology and Pharmacology, 13: 57-149<\/span><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

Testes de avalia\u00e7\u00e3o de genotoxicidade Por: Thayzi O. Zeni Publicado em: 10\/03\/2015   Os cromossomos s\u00e3o amplamente utilizados em estudos citogen\u00e9ticos cl\u00e1ssicos, sendo muito comum a observa\u00e7\u00e3o e quantifica\u00e7\u00e3o de aberra\u00e7\u00f5es durante as divis\u00f5es celulares. Embora o uso da citogen\u00e9tica forne\u00e7a resultados precisos, a complexidade do trabalho a ser realizado e a dificuldade causada pela […]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":1239,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"jnews-multi-image_gallery":[],"jnews_single_post":[],"jnews_primary_category":[],"footnotes":""},"categories":[258,1],"tags":[],"class_list":["post-1242","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-divulgacao-cientifica","category-noticias"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1242","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=1242"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/1242\/revisions"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/media\/1239"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=1242"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=1242"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/gia.org.br\/portal\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=1242"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}